HPLC 분석 결과 값이 제대로 나오지 않는 경우 2

문제가 생겼다.

분석 결과 값이 제대로 나오지 않는 경우를 1편에 이어서 작성해봤습니다.

분석 결과 값에 가장 많이 발생되는 문제점을 기록하였고 해결책도 있습니다. 문제가 발생된다면 정답은 아니지만 해결방법을 가지고 충분히 생각을 하시고 나서 실행해보시는 걸 추천합니다. 분석 장비의 경우는 최대한 조심스럽게 메인턴스를 진행하고 확인해야 합니다. 

 

분석 결과값에 이상한 PEAK가 나온다면?

우리는 일명 고스트 PEAK라고 합니다. 모르는 물질이 나온다면 결과값에 영향을 줄 수 있고 메인으로 보고 있는 검출 성분이 반응하여 결과값에 영향을 줄 수 있습니다. 여러 가지 발생 가능성을 보시도록 하겠습니다.

Ghost peak 의 발생가능 문제	해결방법
오염(contamination)으로 인해 ghost peak 출현	컬럼을 클리닝 및 장비 클리닝 필요 오염인자 제거 (HPLC-grade 용매 사용)
바로 직전의 주입으로부터 분석대상 물질이 컬럼 내에 잔류하여 늦어진 용리 시간으로 인해 발생	분석 마지막 단계에 강한 용매를 사용하여 컬럼을 클리닝합니다.  Gradient 마지막에는 높은 용매 농도를 사용함.
이온 쌍크로마토그래피 (ion-pair chro-mategraphy) 잘못된 평형 상태로 기인	이동상 내에서의 샘플을 준비, 주입 용량 감소하여 실험 주입량이 너무 많이 때문에 문제가 발생 할 수 있다.
역상 크로마토그래피 (Reverse-phase chromatography)  오염된 물로 인해	컬럼을 통과하는 총량과 농축시간의 작용으로 인한 간섭으로 인하여 나타난 peak 높이의 다른 결과로부터 사용하는 물의 적합성을 꼭 체크해야 합니다. (필수) (오래된 역상 컬럼을 사용하는 경우 고순도의 물 사용 HPLC grade 물 즉 초순수 사용)
샘플로부터 미지 간섭의 발생	샘플 주입에 앞서서 전처리(clean-up) 및 분획농축(Prefactionation) 과정 사용(필터사용)하여 간섭을 줄인다.

 

문제 해결

위의 문제로 대부분 해결되리라 믿습니다. 하지만 이런 경우를 벗어나서 안 되는 경우도 있습니다. 위의 방법으로 진행했지만 지속적으로 고스트 PEAK가 나와서 고생한 적이 있습니다.

이런 경우에는 메인턴스를 진행해서 들어가는 소모품을 한 가지씩 교체도 진행해봤습니다. 아무리 세척을 진행하여도 문제가 있는 경우는 분석 물질이 분석 장비 내에 line에 묻어 있어 지속적으로 나올 수 있음을 확인했습니다.

모르는 PEAK가 나오는 경우는 모든 가능성을 열어 놓고 힘들더라고 체크해보시는 걸 추천드립니다.