HPLC에서 컬럼(Coulmn)은 얼마나 중요할까?

컬럼이란?

안녕하세요. 시기입니다:)

HPLC에서 컬럼(Coulmn)은 얼마나 중요할까요? 

개인적인 생각이지만, 컬럼은 분석의 절반이라고 해도 무방하다고 봅니다.

분석 성분에 따라서 컬럼은 다양하지만, 많이 사용하고 있는 컬럼은 무엇일까요?

 

Coulmn C18?

컬럼에는 합성물질이 충진 되어있습니다. 이러한 물질들이 분리를 시키는 목적으로 있는 것이죠.

극성 비극성 등의 반응 등이 검출 물질이 빠르거나 늦게 나오는 현상들을 만들고는 합니다.

• 소재는 다양합니다. 무기 세라믹 또는 고분자 합성물질이 충진이 되어있습니다.
• 혼합성분들을 각각의 단일성분으로 분리시키는 기능을 하고 있습니다. 만약 분리가 안 되는 경우는 충진제로 된 컬럼 및 컬럼의 길이가 다른 컬럼을 사용해야 효과적으로 분리할 수 있습니다.
• 어떤 물리적, 화학적 변화도 잘 적응할 수 있어야 분리에 효과적으로 사용할 수 있습니다. 화학적 변화를 잘 적응 할 수 없다고 한다면, 컬럼을 오래 사용하기 힘들 수도 있습니다.
• 일반적으로 컬럼 안에 있는 물질들을 충진제(packing material)라고 칭합니다. 
• 충진제 종류 : 실리카(silica) / 알루미나(alumina) / 합성 고분자(organic polymer)등으로 구분이 됩니다.

Coulmn 충진제는?

Silica를 대부분 가장 많이 사용합니다.

• 약산성의 성질(사용 가능 범위 pH 2~8)이어서 알칼리 염기성 성분이 과잉된 시료의 경우는 문제를 줄 수 있습니다.
• 낮은 배압(backpressure)으로 이동상 선택의 다양성 제공하여 ACN, MeOH에도 안정적으로 사용 가능합니다.
• 산성 화합물에 깨끗한 Peak가 나온다는 것은 약산성의 성질이 있기 때문이다.
• 시료에 염기성 물질에 대하여 PeaK 모양이 좋지 않으며, PH 적용 범위가 제한 적으로 분석에 영향성을 줌.
• Normal Phase 물질로 비 이온성(non-ionic)을 가진 비극성(none polar)이나 극성(polar)인 유기물질을 분석하는 데 사용한다.

Coulmn은 그냥 사용하나요?

당연히 아닙니다. Coulmn 온도 조절기(Oven)에 넣고 온도 변화를 주어서 사용합니다.

그럼 온도변화를 주는 OVEN의 역할은 어떨까요? 분리 능 향상 및 분석 결과의 재현성 보장을 위해 Coulmn 온도를 적절하게 설정을 변경 및 유지합니다. 제가 사용하는 OVEN의 경우는 40도 정도를 유지하고 사용했습니다.

가끔 OVEN이 고장이 발생하게 되는데 이때 분석 결과는 참담했습니다. 컬럼의 오븐도 분석에 많은 부분을 차지하고 있습니다.

 

Coulmn실제 사용

크로마실 컬럼을 교체하고 안정화를 취한 후에 분석을 진행하였습니다.

분석 결과를 보고는 경악을 금치 못했습니다. PEAK가 난리가 났습니다.

뭉개지는 현상도 일어나고 결괏값이 일정하지 못했습니다.

PH를 확인해 보니까 9.5로 매우 알칼리성입니다.

컬럼에 영향을 직격으로 주고 바로 사용할 수 없는 수준이 되어버렸네요.

바로 교체를 해주고는 전처리를 진행하여 중화를 시켜서 분석하는 방법을 택하고 나서는 컬럼에 영향을 덜 주고 있습니다.

하지만 이러한 분석 결과를 얻기 위해서는 전처리 방법에 대한 고찰이 필요했습니다.